Utilisation stratégique du plasma et la liaison microsomes pour exploiter la clairance in vitro dans la découverte précoce de médicaments Pour réussir la découverte de médicaments, plusieurs points de terminaison ADME doivent être considérés, surveillés e

surveillance de transplanté

Les cellules souches sont importantes pour l’évaluation de l’effet thérapeutique cellulaire.

La technique d’imagerie moléculaire permet une surveillance non invasive du destin

des cellules souches transplantées dans les organismes vivants. L’imagerie moléculaire

modalités utilisant le radionucléide avec positron

tomographie par émission (PET) ou tomodensitométrie par émission de photon unique

fournir une haute sensibilité (10 – 8 à 10 – 9 μ m / L) et une résolution spatiale (1 – 2 mm) .1 264Cu a demi-vie relativement longue (12,7 h) et

ses

propriété de désintégration (β &#x02013 ;, 0,573 MeV [38,4%]; β +, 0,655 MeV [17,8%]; &#x003b3 ;, 0,511 MeV [35,6%]) permet longitudinal

L’imagerie TEP et le suivi des cellules transplantées.3,464Cu peut réagir avec une grande variété de systèmes de chélation, y compris

Acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécane-tétraacétique (DOTA) ou 1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacétique

acide (NOTA) en raison de sa chimie de coordination bien établie.5,6 DOTA peut se lier à de nombreux ions métalliques différents; ainsi, cela conduit à

une diminution de la stabilité in vivo. Néanmoins, DOTA

est actuellement utilisé dans 64Cu-diacétyl-bis (N4-methylthiosemicarbazone

(64Cu-ATSM), approuvé par la Food and Drug Administration des États-Unis

(FDA) aux États-Unis. Donc, chélateur DOTA est mieux cliniquement

disponible et a un processus synthétique simple.764Cu peut potentiellement être lié à la cible, y compris le peptide,

anticorps, ou nanoparticule via le système chélateur spécifié.Membrane

méthodes d’ancrage utilisant une chaîne alkyle longue lipophile ou

groupe oléyle hydrophobe est largement utilisé pour l’ancrage serré avec des lipides

bicouche de la membrane cellulaire.8 − 11 Hexadecyl benzoate (HB) a la propriété lipophile,

donc il s’ancre facilement et étroitement avec la membrane cellulaire. De plus, il

est exempt d’effets médiés par d’autres récepteurs qui existent dans le

cellule. Ma et al. hexadécyl-4-18F-fluorobenzoate développé

(18F-HFB), un ester d’acide benzoïque fluoré à longue chaîne,

et marqué avec la cellule souche mésenchymateuse de rat avec environ 25%

efficacité d’étiquetage. Ils ont rapporté que les cellules souches mésenchymateuses marquées au 18F-HFB injectées par voie intraveineuse présentaient une accumulation persistante

Cependant, la demi-vie de 18F (110 min) est trop courte pour être longitudinale.

surveiller les cellules souches transplantées in vivo. Ici,

nous avons développé un chélateur bifonctionnel DOTA conjugué au HB et étiqueté

avec 64Cu (1), puis étiqueté avec rat

cellules souches dérivées de l’adipose (ADSC). Ensuite, nous avons évalué l’efficacité

de la surveillance longitudinale de 1-marqué transplanté

ADSCs dans le coeur normal de rat.Schéma 1Synthèse du précurseur de 64Cu-Labeled

DOTA-HB, 1Le précurseur de 2 a été préparé en cinq étapes

de l’acide p-amino méthyl benzoïque. Hexadécyl ester

(5) a été préparé à haut rendement par la condensation de

1-hexadécanol

et du phosphite de triphényle à 0 ° C pendant 1 heure. Le composé 2 a été préparé par conjugaison d’ester hexadécylique (5)

et DOTA-mono-NHS-tris (tBu ester) en utilisant le 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ène

(DBU) puis hydrolyse en utilisant l’acide trifluoroacétique (TFA) / DCM / Et3SiH = 8: 2: 1 solution, donnant les produits désirés avec 59%

rendements (schéma 1 et soutien

Figures d’information 1S – 6S) .Scheme 2Chemical Structure

de DOTA-HB marqué au 64Cu, 1Scheme 2 montre la structure chimique de DOTA-HB marqué au 64Cu, 1. 64Cu et HB

ont été conjugués via un chélateur bifonctionnel DOTA. Le rendement de l’étiquetage

de 2 avec 64Cu était de 99,7 ± 0,2% (Figure ​ (Figure11). Figure 1Radio-TLC de 1. Rf = rétention

ADSCs hautement isolées.

marqueurs

CD44 (78,9%) et CD90 (82,5%), tandis que les niveaux d’expression de l’endothélium

ou des marqueurs de cellules hématopoïétiques, y compris CD31 ou CD45 étaient aussi bas que

1,1% et 0,8%, respectivement (Information à l’appui Figure 7S). L’efficacité de l’étiquetage cellulaire était de 25,7 ± 1,4%,

53,0 ± 10,2%,

et 59,4 ± 1,2% à 0,5, 1 et 2 h, respectivement (Figure ​ (Figure2A), 2A), ce qui est plus élevé que les résultats précédemment rapportés

utilisant un agent de marquage cellulaire lipophile.12,13 Etiquetage cellulaire

l’efficacité de 1 était élevée; ainsi, seule la faible dose de 1 suffit pour étiqueter un certain nombre de cellules souches. Figure 2 Efficacité du marquage cellulaire et viabilité cellulaire avec le temps.

(Une cellule

efficacité d’étiquetage de 1 avec ADSC pendant 2 h. (B) Cellule

viabilité des ADSC à 1 marqueur pendant 2 h. Les barres d’erreur indiquent

l’écart-type (n = 3). * P < 0,05; #P < 0,001.La viabilité cellulaire des ADSC 1-étiquetés était de 92,9 ±

0,6, 93,8 ± 6,7, 93,7 et # x000b1; 5,6 et 86,5 ± 0,9% à 0 min,

30 min, 1 h et 2 h, respectivement (Figure ​ (Figure2B) .2B). Adonai et al. ont rapporté que le pyruvaldéhyde-bis (N4-méthylthiosemicarbazone) marqué au 64Cu

Les cellules de gliome C6 marquées au 64Cu-PTSM ont montré 85 et 80%

viabilité cellulaire à 35 et 270 min, respectivement.3 Étiquetage avec 1 a montré une cellule légèrement supérieure

viabilité par rapport au 64Cu-PTSM, 3 et n’a pas affecté de façon significative la viabilité des ADSC (> 85%)

jusqu’à 2 h (Figure ​ (Figure2B) .2B) vérifier les informations suivantes. Nous avons marqué avec 1 pendant 1 h pour obtenir la viabilité cellulaire optimale. La distribution in vivo des ADSC marqués avec 1 a été observée à

1 h après l’injection par un petit animal PET / calculé

scanner de tomographie (CT). La radioactivité associée aux ADSC a été déposée

dans les poumons par l’injection d’ADSC 1-marqué, alors que

dans le groupe de 1 injection la plus grande partie de la radioactivité a été accumulée

dans le foie, puis excrété par la vessie

Information Figure 8S). Les ADSC marqués 1 par injection intraveineuse ont été efficacement piégés dans les poumons, mais par voie intraveineuse

l’agent de marquage 1 injecté n’a pas réagi avec les cellules

la souris et a été métabolisé et excrété par le foie et la vessie.

L’absorption pulmonaire élevée de cellules injectées par voie intraveineuse

études antérieures pour l’étude de la stabilité in vivo

dans les cellules marquées avec des agents radioactifs est le même que les résultats

dans la présente étude.14 − 16 Pour confirmer l’accumulation de 1-étiqueté

ADSC dans les poumons, l’autoradiographie numérique a été réalisée 1 h après

injection de cellules. Dans les poumons, une radioactivité élevée des ADSC a été observée;

ainsi, ce résultat a montré que 1 était étroitement ancré

avec la membrane cellulaire des ADSCs (Information d’appui Figure 9S). En outre, le 1-marqué par voie intramusculaire transplanté

Les ADSC ont été surveillés longitudinalement pendant 18 h dans le cœur de rat normal par

Imagerie PET / CT (Figure ​ (Figure3) .3). Zhang et al. signalé

que l’hexadécyl-4-18F-fluorobenzoate (marqué au 18F-HFB)

progéniteurs circulants humains ont été surveillés de manière non invasive dans

un modèle d’infarctus du myocarde de rat jusqu’à 4 h, mais un suivi à long terme

est impossible en raison de la courte demi-vie de 18F.13 Cependant, dans la présente étude, nous avons utilisé 64Cu, qui a une demi-vie relativement longue; ainsi, les ADSC marqués 1 ont été surveillés in vivo jusqu’à 18 h.

Adonai et al. rapporté qu’un agent lipophile, 64Cu-PTSM,

a été rapidement effluxé de cellules de gliome de rat C6; la radioactivité a diminué

par ∼ 80% à 24 h.3 Aussi, Park et

Al. ont rapporté que la radioactivité de K562 marqué au 64Cu-PTSM injecté par voie intraveineuse (lignée cellulaire de leucémie érythromyéloblastoïde humaine)

Dans les résultats actuels, cependant, les ADSC marqués 1 par injection intramusculaire ont été clairement visualisés sur le site d’injection.

pendant 18 h.Figure 3Petit animal PET / CT image

d’ADSC marqués au 1 à injection intra- myocardique (1,8 –

MBq, 100 μ L) en normale

coeur pendant 18 h. La flèche indique le site de 1 étiquette

ADSC injection.Bien que nous n’avons pas étudié l’effet de 1-étiquetage

sur la fonctionnalité des cellules souches, à travers notre étude précédente un lipophile

agent d’étiquetage similaire à 1, 124I-HIB, a fait

n’affecte pas la différenciation des cellules souches, notamment ostéogénique, chondrogénique,

lignée adipogénique et cardiomyogénique.18 Ainsi, le marquage avec 1 peut ne pas affecter la fonctionnalité des cellules souches. En conclusion, nous avons conçu et synthétisé 1,

un agent d’imagerie TEP, et évalué l’efficacité du suivi de la transplantation

cellules souches dans le coeur de rat normal. Le composé 1 était efficace

étiquetés avec ADSCs, et 1-ADSC étiquetés ont été réussis

suivi in ​​vivo par imagerie TEP. Le marquage cellulaire avec 1 est un agent de marquage cellulaire simple et approprié pour la surveillance

de la distribution in vivo et le dépôt de transplantés

Les cellules souches.