Immunogénicité des toxines pendant l’infection à Staphylococcus aureus

ContexteLes toxines sont des facteurs importants de virulence de Staphylococcus aureus, mais on en sait peu sur leur immunogénicité pendant l’infection. Des études supplémentaires ont été réalisées sur des échantillons de sérums prélevés chez des patients infectés par S. aureus et chez des sujets témoins hospitalisés pour une immunoglobuline IgG liée à des toxines. Les niveaux d’anticorps ont été associés à la présence de gènes de toxine dans les isolats de S aureus homologues. Résultats des niveaux d’IgG dirigés contre la toxine exfoliative ET A, ETB, gélolysine B HlgB, leucocidine Luk D, LukE, LukS, entérotoxine staphylococcique SE A, VOIR, SEH, SEI et SElM étaient plus élevés chez les patients infectés par S aureus que chez les sujets témoins P & lt; En outre, dans le groupe de patients infectés par S aureus, les taux d’IgG étaient plus élevés si les gènes codant pour ETA, ETB, SEA, SEC, SEH, SEIQ, toxine du syndrome de choc toxique TSST- ou Panton-Valentine leucocidine PVL étaient présents dans l’isolat infectieux P & lt; Les niveaux d’IgG anti-SEA ont augmenté pendant les infections avec une intensité de fluorescence médiane positive pour la mer de, à; P & lt; mais pas les souches négatives pour la mer. En outre, les taux d’IgG anti-LukS ont augmenté au cours des infections de la peau et des tissus mous avec une intensité médiane de fluorescence luk-PV-positive de, à; P & lt; mais pas les souches luk-PV-négatives La bactériémie était associée au rapport de cotes en mer; % intervalle de confiance, – et td odds ratio,; % d’intervalle de confiance, – Les infections de la peau et des tissus mous ainsi que les infections osseuses et articulaires étaient associées au rapport de cotes luk-PV,; % intervalle de confiance, -Conclusions Beaucoup de toxines sont exprimées in vivo et reconnues par le système immunitaire au cours des infections staphylococciques, suggérant leur implication dans la pathogenèse de S aureus

Staphylococcus aureus produit de nombreux facteurs de virulence qui contribuent à sa capacité à provoquer des infections Ceux-ci comprennent une variété de toxines qui sont connues pour leurs effets néfastes sur les cellules du système immunitaire De plus, leur activité toxinogène est impliquée dans une large gamme Les toxines staphylococciques peuvent être catégorisées en groupes: superantigènes de toxines pyrogènes PTSAgs, toxines exfoliatives ET, leucocidines et autres toxines La famille des PTSAgs comprend les entérotoxines staphylococciques SE, les toxines de type SE et la toxine du syndrome de choc toxique. TSST- Les superantigènes réticulent les molécules du complexe majeur d’histocompatibilité de classe II sur les cellules présentatrices de l’antigène avec les récepteurs des lymphocytes T, ce qui conduit à une prolifération massive de lymphocytes T et à une libération de cytokine Cette activité pro-inflammatoire disproportionnée intervient dans la pathogenèse des intoxications alimentaires. Les ET sont responsables du syndrome de la peau échaudée staphylococcique et de l’impétigo bulleux Les toxines leucocides constituent une famille de toxines porogènes composées de composants distincts L’effet toxique dépend de l’action synergique des deux classes S Les protéines de la famille des leucotoxines sont LukD, LukE, LukM, γ hémolysine Hlg et Panton-Valentine leucocidine PVL La PVL est associée à une pneumonie nécrosante, à des infections osseuses et articulaires, à une furonculose épidémique et à des abcès. chez les humains Les toxines de la famille des inhibiteurs de la différenciation des cellules épidermiques inactivent les GTPases et bloquent ainsi les fonctions cellulaires immunitaires importantes, telles que la chimiotaxie et la phagocytose Malgré le fait que les toxines sont des facteurs importants de virulence staphylococcique de plus en plus , on sait peu de choses sur la réponse IgG de l’immunoglobuline dirigée contre les PTSAgs, les ET et les leucocidines au cours de l’infection par S aureus i En étudiant la réponse immunitaire, des informations importantes peuvent être collectées concernant l’antigénicité et l’expression in vivo des toxines. Cela pourrait améliorer les connaissances sur la pathogenèse de l’infection à S aureus et contribuer au développement de nouvelles mesures contre les staphylococcies. En outre, nous avons associé les niveaux d’anticorps à la présence de gènes de toxines dans des isolats de S aureus infectieux, et nous avons associé la présence du gène de la toxine à différents types de toxines chez des sujets infectés par S aureus. infection staphylococcique

Matériaux et méthodes

Collection de sérum et de souches de S aureus

Des isolats de S aureus et des échantillons de sérum ont été prélevés chez des patients infectés par S. aureus à l’hôpital Mustapha Pacha à Alger, Algérie pendant le premier échantillon de sérum a été obtenu jours jours après l’identification de la souche. Les échantillons ont été conservés à-° C jusqu’à leur utilisation. Les données sur le sexe, l’âge, le service hospitalier et le type d’infection ont été enregistrées. n = Les patients témoins ont été admis dans la même période mais n’ont pas eu une infection manifeste de S aureus. Les patients ayant un statut immunodéprimé, par exemple, les patients positifs pour le virus de l’immunodéficience humaine ou les patients recevant des corticostéroïdes ou d’autres thérapies immunosuppressives ont été exclues Les patients adultes étaient définis comme ceux âgés de ⩾ ans s Tous les patients ont donné leur consentement éclairé, et le comité local d’éthique médicale de l’hôpital Mustapha Pacha a approuvé l’étude.

Identification bactérienne et détection de gène de toxine

S aureus a été identifié sur la base de la morphologie colique et microscopique, des tests de coagulase avec le plasma de lapin bioMérieux et le test d’agglutination du staphyslide bioMérieux. L’identification a été confirmée par amplification en chaîne par polymérase multiplex amplification PCR du gène régulateur agr et en déterminant l’allèle groupe Les isolats ont été criblés par PCR pour les gènes codant pour la résistance à la méticilline mecA; SE A, B, C, D, H, K, L, M, O, P, Q et R mer-d, seh, selk-m et selo-r; TSST- tst; ETA, ETB et ETD eta, etb et etd; PVL luk-PV; classe F LukM leukocidin lukM; HlgB hlgb; et l’inhibiteur de la différenciation des cellules épidermiques edin, comme décrit ailleurs

Production de toxines recombinantes

Les toxines SEC, SED, SEE, SEH, SEIJ, SElN, SElQ, SER, ETA, ETB, LukF et LukS ont été produites comme décrit ailleurs Les souches S aureus listées dans le tableau ont été utilisées pour produire les autres toxines Escherichia coli M Qiagen et E. coli BL pLys Invitrogen ont été utilisés pour l’amplification plasmidique et les manipulations génétiques. Des amorces ont été conçues suite à l’identification de sites d’hybridation appropriés dans les gènes de toxine. Les amorces ont été choisies au sein de la séquence codante de chaque gène, en omettant la région prédite pour coder le peptide signal, tel que déterminé sur le serveur de prévision de World Wide Web SignalP V http: // wwwcbsdtudk / services / SignalP / Les amorces ont été choisies pour chevaucher le codon d’arrêt des gènes de la toxine Les produits de la Table PCR ont été codigérés avec les enzymes de restriction appropriées Promega, purifiées avec le kit de purification de produit High Pure PCR Roche et ligaturées. chanter T ADN Ligase Roche dans le vecteur d’expression pQE-, pQE- Qiagen ou pIVEX d Roche digéré avec les enzymes de restriction décrites dans le tableau Les plasmides pQE résultants ont été transformés dans la souche E coli M Pour l’expression de la toxine dans pIVEX d, le vecteur a été transformé dans la souche E coli DHaInvitrogen avant la transformation dans la souche E coli BL pLys L’intégrité du cadre de lecture Open a été vérifiée en séquençant les jonctions entre le plasmide et l’insert

Tableau Souches bactériennes et séquences d’amorces utilisées pour la production de toxines de Staphylococcus aureus Toxine S aureus Souches d’Escherichia coli et plasmides Primersa enzymes de restriction SEA A M CTC AGG ATC CAA TGG TAG CGA GAA AAG CG BamHI / PstI pQE CTT TCT GCA GTT AAC TTG TAT ATA AAT ATA TAT CAA TAT GCA TG SEG A M CAA TGG ATC CCC CGA TCT TAA AGA CGA AC BamHI / PstI pQE CGG ACT GCA GTC AGT GAG TAT TAA GAA ATA CTT CC SEI A M CTA TGG ATC CGG TGA TAT TGG TGT AGA TAA C BamHI / PstI pQE CGG ACT GCA GTT AGT TAC TAT CTA CAT ATG ATA TTT CGA C SEIM A M GCA GGA TCC GAT GTC GGA GTT TTG AAT CTT AG BamHI / PstI pQE CGG ACT GCA GTC AAC TTT CGT CCT TAT AAG TTA C TSST- N BL pLys TGG TAC TGG CGG CCGCTC TAC AAA CGA TAA TAT AAA GGA TTT G NotI / PstI pIVEX d CGGACTGCAGT TAATTAATTT CTGCTTCTAT AGTTTTTATT TCATC HIgB ATCC BL pLys TGG TAC TGG CGG CCG CGA AGG TAA AAT AAC ACC AGT C NotI / BamHI pIVEX d CGT CCC TAT TTA TTT TTG TTT TCA GTT TCT TTT GTA TC LukD A BL pLys ACC CTT AAT TAA AGC TCA AAA TAT CAC ACC TAA AAG PacI / BamHI pIVEX d ACG CGG ATC CTT ATA CTC CAG GAT TAG TTT CTT TAG LukE RN BL pLys ACG CGG ATC CTT AAT TAT GTC CTT TCA CTT TAA TTT BamHI / PacI pIVEX d ACC CTT AAT TAA AAA TAC TAA TAT TGA AAA TAT TGG TGA TGG TGC Souches de toxine S aureus Souches d’Escherichia coli et plasmides Primersa enzymes de restriction SEA A M CTC AGG ATC CAA TGG TAG CGA GAA AAG CG BamHI / PstI pQE CTT TCT GCA GTT AAC TTG TAT ATA AAT ATA TAT CAA TAT GCA TG SEG A M CAA TGG ATC CCC CGA TCT TTA AGA CGA AC BamHI / PstI pQE CGG ACT GCA GTC AGT GAG TAT TAA GAA ATA CTT CC SEI A M CTA TGG ATC CGG TGA TAT TG TG TG AGG TAA C BamHI / PstI pQE CGG ACT GCA GTT AGT TAC TAT CTA CAT ATG ATA TTT CGA C SEIM A M GCA GGA TCC GAT GTC GTG TTG AAT CTT AG BamHI / PstI pQE CGG ACT GCA GTC AAC TTT CGT CCT TAT AAG ATA TTT C TSST-N BL pLys TGG TAC TGG CGG CCGCTC TAC AAA CGA TAA TAT AAA GGA TTT G NotI / PstI pIVEX d CGGACTGCAGT TAATTAATTT CTGCTTCTAT AGTTTTTATT TCATC HIgB ATCC BL pLys TGG TAC TGG CGG CCG CGA AGG TAA AAT AAC ACC AGT C NotI / BamHI pIVEX d CGG GAT CCC TAT TTA TTG TTT TCA GTT TCT TTT GTA TC LukD A BL pLys ACC CTT AAT TAA AGC TCA AAA TAT CAC ACC TAA AAG PacI / BamHI pIVEX d ACG CGG ATC CTT ATA CTC CAG GAT TAG TTT CTT TAG LukE RN BL pLys ACG CGG ATC CTT AAT TAT GTC CTT TCA CTT TAA TTT BamHI / PacI pIVEX d ACC CTT AAT TAA AAA TAC TAA TAT TGA AAA TAT TGG TGA TGG TGC NOTE HlgB, γ hémolysine B; Luk, leucocidine; SE, entérotoxine staphylococcique; SE1, type entérotoxine staphylococcique; TSST-, syndrome de choc toxique toxine-aRestriction sites sont soulignésView Large

Purification de protéines

Des cellules E coli transformées en croissance exponentielle dans du milieu LB Luria-Bertani additionné d’ampicilline μg / mL ont été inoculées dans du litre de milieu LB frais et incubées avec agitation rotative continue pendant – h à ° C jusqu’à OD – Ensuite, l’expression a été induite par l’isopropyle Les cultures ont ensuite été centrifugées à 0 ° C pendant min à ° C. Les culots cellulaires ont été stockés pendant une nuit à -C Les culots cellulaires ont été décongelés pendant min sur de la glace et remis en suspension dans du tampon de lyse Qiagen. Les lysats ont été soniqués sur de la glace après addition de lysozyme. Ensuite, les lysats ont été centrifugés à min à ° C et les surnageants ont été recueillis. Les protéines marquées His ont été purifiées sur des colonnes d’acide Ni-nitrilotriacétique Qiagen et dialysées contre du phosphate salin tamponné. les concentrations ont été déterminées selon la méthode de Bradford, en utilisant la sérumalbumine bovine comme standard. Les toxines ont été contrôlées par le dodécylsulfate de sodium-poly électrophorèse sur gel d’acrylamide et spectrométrie de masse Ultraflex MALDI-ToF; Bruker Daltonics

Mesure des anticorps anti-toxines

Les niveaux d’IgG dirigés contre les toxines ETA, ETB, Hlgb, LukD, LukE, LukF, LukS, SEA, SEC, SED, SEE, SEG, SEH, SEI, SEIJ, SElM, SElN, SElQ, SER et TSST ont été quantifiés. en utilisant simultanément une technique de cytométrie de flux à base de billes xMap; Les tests ont été réalisés dans des duplicatas indépendants, et les valeurs médianes d’intensité de fluorescence MFI, reflétant les niveaux d’anticorps semi-quantitatifs, ont été moyennées. Dans chaque expérience, des billes témoins sans toxine couplée ont été incluses pour déterminer la liaison non spécifique. En cas de liaison d’anticorps non spécifique, les valeurs de MFI non spécifiques ont été soustraites des résultats spécifiques à l’antigène. Le sérum humain combiné a été utilisé comme standard

analyses statistiques

Les analyses statistiques ont été réalisées avec le logiciel SPSS, les tests SPSS Kruskal-Wallis et Mann-Whitney U ont été utilisés pour comparer les différences de niveaux d’anticorps anti-toxine entre les patients et les sujets témoins. Le test χ a été appliqué aux variables catégorielles et la régression logistique binaire ratios ORs Pour comparer les niveaux d’anticorps dans le premier et le second échantillon de sérum de chaque patient, on a utilisé le test de rang signé signé Wilcoxon P & lt; a été considéré comme statistiquement significatif

Résultats

Caractéristiques du patient

Le groupe des patients infectés par S aureus était composé d’adultes et d’enfants. Leur âge médian était de plusieurs années. Le rapport hommes-femmes était: Parmi les patients,% avaient des infections de la peau et des tissus mous. par exemple, la furonculose, les lésions cutanées infectées ou la folliculite; % avaient une bactériémie; % avaient des infections osseuses ou articulaires, par exemple, l’arthrite ou l’ostéite; % avaient une infection respiratoire, par exemple, une bronchite; % avaient une infection oculaire, par exemple, une conjonctivite ou une endophtalmie; % avaient une infection des voies urinaires; % avaient une infection de l’oreille, du nez ou de la gorge, par exemple, une sinusite; et% avaient une infection du système nerveux central. Le groupe de patients témoins était composé d’adultes et d’enfants. L’âge médian était de plusieurs années et le rapport homme-femme était:

Validation et variation inter-essai du dosage multiplex toxine

Les valeurs de MFI obtenues pour le sérum humain combiné avec le sérum multiplex incubé avec les billes couplées à l’antigène colorées différemment colorées se situaient entre% et% médian des valeurs de MFI obtenues avec les sérums individuels incubés avec chaque couleur individuelle de Par conséquent, le test multiplex a été considéré comme fiable. La variation inter-essai a été calculée à partir des valeurs de MFI obtenues pour le sérum humain combiné, qui a été inclus sur chaque plaque. % range,% -%, ce qui est comparable à ce qui a été trouvé dans d’autres études

Différences dans les niveaux d’IgG anti-toxine entre les différents types d’infection à S aureus

Les niveaux d’anticorps spécifiques aux toxines S aureus ont été mesurés. Les niveaux d’anticorps spécifiques à la toxine ont montré une variabilité interindividuelle étendue. Les niveaux d’IgG dirigés contre les toxines ETA, ETB, HlgB, LukD, LukE, LukS, SEA, SEE, SEH, SEI et SElM étaient significativement plus élevé chez les patients adultes infectés par S. aureus que chez les patients adultes témoins dans le premier et le second échantillon de sérum P & lt; Figure A Les patients adultes atteints d’infections respiratoires, par opposition à d’autres infections à S aureus, présentaient des taux plus élevés d’IgG par rapport à l’indice MFI médian SED, vs; P & lt; , SEJJ vs; P & lt; et SER vs; P & lt; Figure B Chez les patients adultes avec SSTI, le niveau d’IgG anti-ETA était élevé vs; P & lt; Au cours du SSTI, des infections respiratoires et osseuses et articulaires, les taux d’IgG n’ont pas augmenté chez les patients bactériémiques, le taux d’IgG dirigé contre HlgB, LukD, LukE, LukF, LukS et SEE semblait augmenter au cours de l’infection mais l’augmentation n’était pas statistiquement significative P = – Figure B

Figure Vue largeDownload, Niveaux d’immunoglobulines IgG spécifiques aux toxines chez les patients infectés par Staphylococcus aureus versus patients témoins et adultes versus enfants Les niveaux d’IgG sont reflétés par l’intensité médiane de fluorescence Valeurs MFI Les flèches noires indiquent des différences significatives entre le patient infecté par S aureus et le patient contrôle Groupe P & lt; par Mann Whitney U test Les résultats sont présentés pour le premier échantillon de sérum B, Différences de niveau d’IgG spécifiques de la toxine entre le premier et le deuxième échantillon de sérum et entre différents types d’infections à S aureus chez les adultes. représente le niveau d’IgG médian dans le premier échantillon de sérum; la deuxième barre du même motif représente le taux médian d’IgG dans le second échantillon de sérum ET, toxine exfoliative; HlgB, γ hémolysine B; Luk, leucocidine; SE, entérotoxine staphylococcique; SEI, type entérotoxine staphylococcique; TSST-, syndrome de choc toxique toxine-figure View largeTélécharger slideA, IgG spécifiques des toxines IgG chez les patients infectés par Staphylococcus aureus versus patients témoins et adultes versus enfants Les niveaux d’IgG sont reflétés par l’intensité médiane de fluorescence Valeurs MFI Les flèches noires indiquent des différences significatives entre Les résultats sont montrés pour le premier échantillon de sérum B, Différences dans le niveau d’IgG spécifique à la toxine entre le premier et le deuxième échantillon de sérum et entre différents types d’infections à S aureus. chez l’adulte La première barre de chaque motif représente le taux médian d’IgG dans le premier échantillon de sérum; la deuxième barre du même motif représente le taux médian d’IgG dans le second échantillon de sérum ET, toxine exfoliative; HlgB, γ hémolysine B; Luk, leucocidine; SE, entérotoxine staphylococcique; SEI, type entérotoxine staphylococcique; TSST-, toxine du syndrome de choc toxique Chez les enfants infectés par S aureus, les niveaux d’IgG dirigés contre les protéines ETA, HlgB, LukD, LukE, LukF et LukS étaient significativement plus élevés P & lt; Figure A que chez les enfants sans infections à S aureus Étonnamment, le niveau d’anti-TSST-IgG était plus élevé chez les patients témoins jeunes médian vs MFI; P & lt; que chez les patients infectés par S aureus Dans le groupe des patients S aureus, les taux d’IgG à des protéines étaient plus élevés chez les adultes que chez les enfants. Aucune différence n’a été démontrée dans les IgG anti-LukD, anti-LukF et anti-SER Dans le groupe témoin, les taux d’IgG dirigés contre toutes les protéines étaient significativement plus élevés chez les adultes que chez les enfants P & lt; Figure A

Prévalence des gènes codant pour les toxines S aureus

La prévalence des gènes codant pour les toxines de S aureus dans les isolats infectieux est indiquée dans le tableau des isolats, le gène% de la toxine hébergée. Les gènes les plus prévalents étaient edin, luk-PV et etd, détectés en%,% et% d’isolats. , respectivement, les gènes codant pour SED, SER et LukM n’ont été trouvés dans aucun des isolats. La bactériémie a été associée à une prévalence plus élevée du gène tst et de la mer. Isolats récupérés chez% des patients bactériémiques versus isolats chez% des autres patients de patients bactériémiques par rapport à des isolats provenant de% des autres patients ont été positifs au P & lt; et P & lt; , respectivement Tableau SSTI et infections osseuses et articulaires étaient associées à une prévalence plus élevée de luk-PV P & lt; Les isolats récupérés chez% des patients ayant un SSTI ou une infection osseuse par rapport à% des autres patients étaient positifs pour le luk-PV P & lt; Table

Tableau Présence de gènes de toxine dans les souches de Staphylococcus aureus isolées de patients présentant différents types d’infection à S aureus Non% d’isolats géniques positifs Toxine SSTI n = Bactériémie n = Infection osseuse n = Infection respiratoire n = Autre infection n = Total n = OU % CIa P … se NS … NS seh … NS selk … NS vend … NS selm … NS selo … NS selp … NS selq … NS tst – eta … NS etb … NS etd … NS luk-PV – hlgb … NS edin … NS No% d’isolats génétiquement positifs Gène de toxine SSTI n = Bactériémie n = Infection osseuse n = Infection respiratoire n = Autre infection n = Total n = OU% CIa P … se NS … NS seh … NS selk … NS vend … NS selm .. cialis generique. NS selo … NS selp … NS selq … NS tst – eta … NS etb … NS etd … NS luk-PV – hlgb … NS edin … NS NOTE Les caractères en caractères gras indiquent les gènes qui sont significativement plus fréquents dans les souches isolées d’un type particulier d’infection CI, intervalle de confiance; edin, inhibiteur de la différenciation cellulaire épidermique; et, la toxine exfoliative; hlgb, γ hémolysine; luk-PV, leucocidine de Panton-Valentine; NS, non significatif; OU; odds ratio; se, entérotoxine staphylococcique; sel, type entérotoxine staphylococcique; SSTI, infection de la peau et des tissus mous; La toxine-aORs du syndrome de choc toxique a été calculée à l’aide de la régression logistique binaire. LargeOut de tous les isolats infectieux de S. aureus,% étaient MSSA sensibles à la méticilline, et% étaient résistants à la méthicilline SARM La prévalence de la mer, seb, sec, seh, sell, selm , selo, tst, et hlgb était plus élevé parmi les taches de MSSA; etd, luk-PV et edin étaient plus fréquents parmi les souches de SARM P & lt; Tableau Dans le groupe des infections à SASM ou à SARM, la prévalence des gènes de la toxine n’était pas significativement différente entre les infections nosocomiales et communautaires. Tableau

Tableau Différence en présence de gènes de toxine entre Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline MRSA et isolats MSSA sensible à la méthicilline Non% d’isolats géniques positifs Toxine gène MSSA n = MRSAa n = HA-MSSA n = CA-MSSA n = HA-SARM n = CA-MRSA n = mer b séb b sec c seh b selk vend c selm b selo b selp tt b éta etb etd b luk-PV b edin b hlgb b No% d’isolats géniques positifs Toxine gene MSSA n = MRSAa n = HA-MSSA n = CA-MSSA n = HA-SARM n = CA-SARM n = mer b séb b sec c seh b selk vendre c selm b selo b selp selq Tst b eta etb etd b luk-PV b edin b hlbb b NOTE CA, communauté acquise; HA, valeurs acquises de l’hôpital & lt; par le test were ont été considérés comme statistiquement significatifs. cP & lt; Voir grand

Association des niveaux d’IgG anti-toxine avec la présence de gènes de toxine dans les isolats infectieux de S aureus

Les données sur la présence de gènes et les niveaux d’anticorps anti-staphylococciques étaient disponibles pour les combinaisons ETA, ETB, SEA, SEC, SED, SEH, SElM, SEIQ, SER, TSST-, HlgB, LukS et LukF. Il n’y avait pas de sed- et ser- isolats positifs Les taux d’anticorps étaient élevés si le gène était présent dans eta, etb, mer, sec, seh, selq, tst et luk-PV des combinaisons P & lt; Figure En outre, chez les patients atteints d’infection à S aureus positive à la mer, les titres d’IgG anti-SEA ont augmenté de manière significative au cours de l’infection médiane MFI, de, à,; P & lt; En outre, chez les patients ayant un SSTI causé par une souche positive pour le PV-luk, le niveau d’IgG anti-LukS non anti-LukF a augmenté significativement l’IFM médiane, de, à; P & lt; Aucune augmentation du taux d’IgG n’a été observée dans les infections à S. aureus exposées à la mer et au luk-PV-négatif

Figure Vue largeDownload Diapositives montrant la relation entre les présences des gènes des toxines dans les isolats et les taux d’IgG anti-toxine IgG dans le sérum des patients infectés par Staphylococcus aureus Les résultats pour eta et etb ne sont pas présentés en raison du faible nombre de gènes. isolats positifs n = et n =, respectivement La boîte représente le th, le th et le percentile, la moustache représente la valeur la plus basse et la plus élevée obtenue Luk, leukocidine; SE, entérotoxine staphylococcique; SEI, type entérotoxine staphylococcique; TSST-, syndrome de choc toxique toxine-Figure View largeTélécharger Diagrammes montrant les relations entre les présences des gènes des toxines dans les isolats et les niveaux d’IgG anti-toxine IgG dans le sérum des patients infectés par Staphylococcus aureus Les résultats pour eta et etb ne sont pas montré en raison du petit nombre d’isolats positifs pour le gène n = et n =, respectivement. La case représente le th, le th et le percentile, la moustache représente la valeur la plus basse et la plus élevée obtenue Luk, leukocidine; SE, entérotoxine staphylococcique; SEI, type entérotoxine staphylococcique; TSST-, syndrome de choc toxique toxine-

Discussion

Pour la majorité des toxines, les taux d’IgG antistaphylococciques étaient plus élevés chez les adultes que chez les enfants et les taux d’IgG étaient plus élevés chez les patients infectés par S aureus que chez les sujets témoins hospitalisés. Figure A et B Ceci suggère que l’état immunitaire humorale anti-staphylococcique un individu se développe au cours des années et dépend probablement de l’histoire des confrontations avec S aureus Les niveaux d’IgG dans le sérum des patients étaient plus élevés si le gène de la toxine était présent dans leurs isolats infectieux dans des combinaisons Figure Figure seh, selq, tst et luk-PV sont activement exprimés et stimulent le système immunitaire humoral au cours des infections à S aureus. Pour PVL et SEA, il existe un soutien supplémentaire pour l’expression in vivo durant les infections à S aureus, comme l’ont montré Croze et al. ] pour PVL Le taux d’IgG anti-SEA a augmenté pendant une période de plusieurs semaines au cours des infections causées par des souches positives pour la mer mais non négatives pour la mer. Le taux d’IgG anti-SEE n’a pas augmenté, bien que h des études antérieures ont observé une réactivité croisée avec des anticorps anti-SEA En outre, le taux d’anticorps anti-LukS a augmenté en l’espace de deux semaines chez les patients souffrant de SSTI causés par des souches luk-PV-positives mais non-luk-PV-négatives P & lt; Contrairement à LukS, les taux d’IgG dirigés contre LukF n’étaient pas plus élevés si les isolats étaient positifs pour le luk-PV, et aucune augmentation d’IgG anti-LukF n’a été détectée chez les patients ayant un SSTI luk-PV-positif, une IgGa anti-LukS dominante et b réponse développée après l’immunisation des souris par voie sous-cutanée avec les deux composants En outre, les souris vaccinées par voie intranasale généraient des IgA anti-LukS, mais pas d’IgA anti-LukF Par conséquent, il semble que LukS est la sous-unité protéique antigénique dominante chez la souris. infections à aureus causées par des souches autres que les souches positives pour la mer ou le luk-PV, le taux d’IgG spécifiques des toxines n’a pas augmenté au cours de l’infection. Ceci suggère que, dans le cas du SSTI, les infections respiratoires et osseuses et articulaires, ces infections n’ont pas provoqué une forte réponse immunitaire humorale systémique. En variante, les différences de taux d’anticorps entre les échantillons étaient non significatives en raison des taux élevés d’IgG anti-toxine prémorbides. Des taux élevés d’IgG préexistants pourraient être les Par la suite, cela suggérerait que ces anticorps ne protègent pas contre ces types d’infection staphylococcique. L’IgG anti-toxine préformée pourrait également expliquer les niveaux élevés d’IgG anti-SED et anti-SER qui ont été retrouvés chez des patients ayant une infection respiratoire, même si les isolats de S aureus causatifs étaient sed et ser négatifs. La bactériémie était associée à une forte prévalence de la mer et de la tst, au SSTI et aux infections ostéo-articulaires avec une prévalence élevée de luk-PV. études antérieures [, -] Les gènes les plus prévalents dans les isolats cliniques de S aureus chez les patients algériens étaient edin%, luk-PV% et etd% Tableau Ces gènes étaient plus fréquents chez les SARM que chez les souches MSSA P & lt; Tableau Probablement, ceci est dû à l’occurrence fréquente du clone MRSA-ST luk-PV-, etd- et edin-positif prédominant en Algérie Nous avons mesuré la liaison d’IgG aux toxines, mais nous n’avons pas de données sur capacité neutralisante et réactivité croisée de ces anticorps Dans des études antérieures, la capacité neutralisante des anticorps anti-TSST, SEA, SEB, SEC et SEE a été observée Une réactivité croisée a été démontrée entre les anticorps anti-SEA et anti-SEE et entre Les anticorps anti-SEB et anti-SEC Pour les autres entérotoxines, les titres d’anticorps spécifiques des toxines hétérologues étaient inférieurs à ceux dirigés contre la toxine utilisée pour l’immunisation, ce qui plaide contre une forte réactivité croisée Connaissance de la réactivité croisée En outre, nous ne connaissons pas l’état de porteur de S aureus des patients car les porteurs nasaux de S aureus ont un risque accru d’infection et près de% des infections sont endogènes, leur niveau Par conséquent, y compris les cultures d’écouvillonnage nasal dans les études futures est important En conclusion, au cours de l’infection à S aureus, les toxines ETA, ETB, SEA, SEC, SEH, SElQ, TSST- et Luk-PV sont activement exprimés et reconnus par le système immunitaire humoral S aureus bactériémie est associée à une forte prévalence de la mer et de la tst alors que SSTI et les infections osseuses et articulaires sont associées à la présence de luk-PV. les taux d’IgG anti-SEA et d’IgG anti-Luk-PV sont observés chez tous les types d’infection et chez les SSTI, suggérant leur implication dans la pathogenèse staphylococcique

Remerciements

Nous remercions Muriel Croze, Jean Philippe Rasigade, Caroline Bouveyron, Christine Courtier, Christine Gardon, Céline Spinelli, Annie Martra, Martine Rougier, Théo Hoogenboezem, Claudia Brandt-Hagens et Diana Dufour-van den Goorbergh pour leur aide technique. Conflits d’intérêts potentiels Tous auteurs: pas de conflits