Susceptibilité antivirale des virus de l’herpès simplex et de ses corrélats cliniques: l’expérience d’un seul centre

La sensibilité in vitro à l’acyclovir des isolats du virus herpès simplex provenant de patients immunodéprimés traités dans notre hôpital a été déterminée par le test de réduction des effets cytopathiques. Environ% du virus herpès simplex et% des isolats du virus herpès simplex ont été inhibés par l’acyclovir à des concentrations de & lt; μg / mL Parmi les patients%, un isolat ayant une faible sensibilité à la dose inhibitrice d’acyclovir%, & gt; Les lésions ont été résolues chez la plupart des patients, indépendamment du traitement. Les échecs thérapeutiques n’ont pas toujours été associés à l’isolement d’un virus in vitro. Au contraire, lorsqu’un virus présentant une faible sensibilité à l’acyclovir était isolé, la résolution de la lésion était la règle Chez les patients ayant des épisodes récurrents de la maladie, la sensibilité des virus isolés était similaire à celle du premier épisode Les tests de sensibilité de routine dans notre zone géographique ne sont pas encouragés en raison de la faible incidence d’acyclovir virus herpès simplex résistants

Les infections causées par le virus herpès simplex HSV sont une cause majeure de morbidité chez les hôtes immunodéprimés, tels que les patients positifs pour le VIH ou en cours de transplantation d’organe. Acyclovir Acv est le médicament de choix pour le traitement de ces patients Administré par voie orale ou intraveineuse. L’excrétion virale et accélère la cicatrisation Le traitement topique peut également être utile chez ces patients, bien qu’il ne soit pas aussi efficace Les infections HSV muqueuses sont habituellement auto-limitées chez l’hôte immunocompétent car les immunodéprimés ne peuvent pas dépendre du système immunitaire. virus, l’infection peut entraîner une maladie ulcéreuse étendue et persistante avec une excrétion virale continue et l’absence de réponse à un traitement prolongé par Acv; Des souches de VHS moins sensibles ou résistantes à l’Acv ont parfois été récupérées chez ces patients . Chez les patients immunodéprimés recevant l’Acv pour la prise en charge de l’HSV aiguë, l’incidence de la résistance est extrêmement faible. En outre, les souches Acv-résistantes L’utilisation de tests de sensibilité pourrait aider à améliorer la prise en charge des patients atteints d’herpèsvirose qui ne répondent pas aux schémas thérapeutiques standard. Les patients dont les lésions persistent ou s’aggravent pendant qu’ils reçoivent un traitement par Acv pourraient bénéficier de la susceptibilité. études Dans de tels cas, la connaissance de la sensibilité in vitro d’une souche à l’Acv serait utile pour la sélection d’un autre traitement antiviral , qui pourrait impliquer d’augmenter la dose d’Acv par voie orale ou de passer à une perfusion continue à forte dose d’Acv. qui ne répondent pas aux schémas standard de Acv Pour déterminer la susceptibilité de HSV à Acv, Les tests les plus fréquemment utilisés sont le test de réduction de la plaque PRA, le test de réduction de l’effet cytopathogène viral CRA, la méthode de dyeuptake DUA et le test d’hybridation de l’ADN. Il n’existe pas de consensus sur le niveau de sensibilité in vitro. virus résistants, mais de nombreux types d’essais ont montré que les isolats résistants à l’Acv sont généralement sensibles à une concentration en Acv de> μg / mL Néanmoins, la corrélation entre les résultats cliniques et la sensibilité in vitro à l’Acv n’a pas été établie , et d’autres études sont nécessaires Le présent article rend compte des résultats des tests de sensibilité des isolats HSV de patients immunodéprimés qui ont fréquenté un hôpital universitaire de soins tertiaires et fournit des données supplémentaires sur les corrélats cliniques aux résultats in vitro

Patients, matériaux et méthodes

Patients et techniques d’isolement viral Un total d’isolats d’isolats de VHS et d’isolats de VHS ont été retrouvés chez des patients immunodéprimés atteints de SIDA, atteints de tumeurs malignes hématologiques, ayant subi une transplantation cardiaque et ayant reçu une greffe de moelle osseuse sous corticothérapie, atteints de néoplasies, ayant subi une transplantation rénale, présentant une hypogammaglobulinémie variable commune et ayant un diabète. Des souches HSV ont été isolées de lésions cutanéo-muqueuses, exsudatives orales, pharyngées, nasales, labiales, génitales, anales et cutanées, des prélèvements de lavage broncho-alvéolaire. Pour l’isolement de HSV, des échantillons pour la culture ont été systématiquement obtenus par écouvillonnage à la base des ulcères cutanés ou muqueuses. Les écouvillons ou les spécimens ont été placés dans un milieu de transport et inoculés sur des échantillons de sérum physiologique. monocouches cellulaires, habituellement cellules Vera ou HeLa Liquides BAL et biopsies s les échantillons ont été transportés au laboratoire sans utilisation de milieu de transport Si des échantillons étaient disponibles pour le même épisode de maladie, les deux ont été utilisés: isolement, identification et typage du virus à l’aide du test de confirmation / typage de culture Microtrak HSV- / HSV; Syva ont été réalisées en utilisant des techniques classiques Les virus ont ensuite été passés dans des cellules Vero pour produire un stock de travail avec un titre connu et conservés à-° C jusqu’à ce que des tests de sensibilité soient effectués. En résumé, les cellules Vero ont été cultivées et maintenues dans le milieu essentiel minimal d’Eagle supplémenté avec des acides aminés non essentiels, de la L-glutamine et du sérum de veau fœtal. Des cultures de cellules ont été infectées avec la gamme ~ TCID. , – TCID de chaque virus, et dilutions en série de la gamme Acv, – μg / mL ont été ajoutés aux puits Après incubation pour h, l’effet cytopathique de chaque souche a été enregistré et marqué comme positif ou négatif Nous avons considéré un résultat de puits être positif s’il y avait les lésion focale de l’effet cytopathique La méthode de Kärber a été utilisée pour déterminer la concentration du médicament entraînant une réduction de% du cytopath viral Effet icique, ou ID de dose inhibitrice et% ID inhibitoire de l’Acv, c’est-à-dire la dilution à laquelle% ou% des cultures inoculées ont eu des résultats négatifs. Les résultats sont exprimés en microgrammes par millilitre Le passage en présence d’Acv a été introduit dans l’étude en tant que témoin aimablement fourni par le Dr F Salmerón, Centre Nacional de Microbiología, Virología e Inmunología Sanitarias de Majadahonda, Espagne Contrôlez les puits qui contenaient exclusivement des cellules avec virus ou la plus haute concentration d’Acv μg / mL ont été inclus dans chaque dosage Parmi les patients, des dossiers médicaux étaient disponibles, pour lesquels il y avait un total d’épisodes de maladie à HSV. Le traitement et l’évolution des lésions ont été examinés

Résultats

Susceptibilité antivirale Les susceptibilités in vitro à l’Acv des isolats cliniques de VHS récupérés chez les patients ont été déterminées. L’ID médiane d’Acv pour HSV- était de μg / mL, – μg / mL pour HSV-, l’ID médian était μg / mL range, – μg / Environ 100% des isolats HSV ont été inhibés par les concentrations de Acv de & lt; μg / mL et>% ont été inhibés par des concentrations de & lt; μg / mL Un total de% d’isolats HSV ont été inhibés par les concentrations de Acv de & lt; μg / mL Des souches de virus étudiées,%; la souche de HSV- et les souches de HSV- ont montré une sensibilité à Acv à un ID de & gt; μg / mLA Bien qu’un large spectre de susceptibilités ait été trouvé parmi les souches HSV étudiées, aucune de ces souches n’avait une valeur ID d’Acv comparable à celle de la souche ID résistante, μg / mL. Pour les patients dont les souches étaient récupérées du même épisode de la maladie, les valeurs d’Acv ID étaient très similaires Toutes les souches isolées à partir de lésions autres que des lésions mucocutanées avaient des valeurs Acv ID de & lt; μg / mL

Tableau View largeTélécharger les valeurs de susceptibilité pour le virus de l’herpès simplex HSV isolées récupérées pendant les épisodes simples de HSVTable View largeTélécharger les diapositives Valeurs de susceptibilité pour le virus de l’herpès simplex HSV isolats récupérés pendant les épisodes uniques de HSV responseClinical response Nous avons enregistré des données sur le traitement et l’évolution des épisodes patients La thérapie Acv a été administrée pour les épisodes Dans les cas, le traitement était oral; dans les cas, intraveineuse; et, dans certains cas, topique Dans les cas, la voie d’administration a été combinée orale et / ou intraveineuse et / ou topique. Les lésions résolues dans les cas Pour les patients, les lésions ne se sont pas résolues, malgré un traitement antiviral. leur maladie en quelques jours avait reçu une greffe de moelle osseuse, avait un lymphome et avait le SIDA; ces patients ont été exclus de l’analyse. Les autres patients ont reçu un traitement prolongé, et leurs lésions se sont améliorées mais n’ont pas complètement guéri. Les isolats de VHS récupérés de ces lésions étaient sensibles à l’Acv ID et μg / mL. progression de leur maladie Les patients AIDSSix n’ont reçu aucun traitement antiviral et leurs lésions ont été résolues spontanément Parmi les patients avec des données disponibles pour l’analyse, les patients ont eu une persistance des lésions et ont échoué à éradiquer le virus. à l’Acv lorsque le traitement a été initié, et les lésions du patient ont répondu à l’Acv lorsque les doses ont été augmentées Pour ces patients, la sensibilité in vitro du VHS isolé à différents moments et de différents sites, le traitement administré et l’évolution des épisodes de les maladies sont indiquées dans le tableau Données cliniques disponibles concernant des patients individuels fr om auxquels isolats ont été récupérés avec des valeurs Acv ID de & gt; μg / mL sont présentés dans le tableau Toutes les lésions de ces patients ont été résolues

Tableau View largeDownload slideSusceptibilité du virus de l’herpès simplex HSV isolats récupérés chez des patients présentant des lésions persistantesTable View largeDownload slideSusceptibilité des virus de l’herpès simplex HSV isolés de patients présentant des lésions persistantes

Tableau View largeTélécharger la lame Caractéristiques cliniques des patients infectés par le virus de l’herpès simplex HSV présentant une faible sensibilité au traitement par l’acyclovirTable View largeTélécharger les lamesClinicalité des patients infectés par le virus de l’herpès simplex HSV peu sensibles au traitement par acyclovirRecurrences de la maladie après traitement de la maladie ont été séparés par – mois De souches de HSV isolé, seulement eu un tableau Acv ID élevé Le patient a eu des épisodes au cours de la période d’étude; Dans le troisième épisode, une souche HSV résistante a été isolée et, quelques jours après la résolution de cet épisode sans traitement, une souche HSV sensible a été isolée.

Tableau View largeDownload slideSusceptibilité du virus de l’herpès simplex HSV isolats récupérés lors des récurrences de la maladie chez les patientsTable View largeDownload slideSusceptibilité des virus de l’herpès simplex HSV isolats récupérés lors de récurrences de la maladie chez les patients

Discussion

Nous avons constaté que des tests répétés sur plusieurs échantillons de la même lésion ont révélé un tableau de susceptibilité similaire, ce qui indique que le test possède un degré de reproductibilité acceptable. Nos résultats montrent que la valeur ID moyenne pour HSV-μg / mL est presque HSV- μg / mL Ces différences et le chevauchement des valeurs pour les types de virus confirment les observations précédentes Il n’y a pas de consensus sur le niveau de sensibilité in vitro qui indique un virus résistant, mais la plupart des chercheurs sont d’accord sont généralement sensibles aux concentrations de Acv de & gt; μg / mL Cependant, Chatis et Crumpacker ont souligné qu’une valeur d’Acv ID de & gt; μg / mL est inhabituellement élevé pour la définition de la résistance à Acv, et l’utilisation de cette valeur pourrait sous-estimer l’incidence réelle de la résistance. Nous avons détecté des souches HSV- et HSV- ou% des souches isolées qui avaient des valeurs Acv ID de & gt; μg / mL Swierkosz et Biron ont proposé que lorsque le DUA est utilisé pour étudier la susceptibilité, la valeur ID indiquant la résistance serait & gt; μg / mL Dans notre étude,% des souches de virus étudiées récupérées chez% des patients étaient résistantes à des valeurs d’Acv ID de μg / mLIl convient de noter que, bien qu’une faible sensibilité à l’Acv in vitro ait été détectée dans les souches HSV de notre étude, la résistance ne semble pas être la principale cause d’échec du traitement, car d’autres facteurs, tels que l’état immunologique du patient, peuvent avoir contribué à la mauvaise réponse clinique. Les dossiers médicaux étaient disponibles pour les patients infectés par des souches du VHS. était & gt; μg / mL à la présentation Les lésions de tous ces patients ont été résolues, avec ou sans tableau de traitement Acv. D’autre part, la persistance des lésions en dépit du traitement était sans rapport avec l’Acv ID de la souche infectante. les lésions ont persisté et ont finalement été résolues. Le tableau montre que tous les isolats étaient sensibles à Acv. Le patient a reçu un régime standard d’Acv, et l’isolat HSV était sensible in vitro Pendant le traitement, une nouvelle lésion est apparue à un autre site probablement à cause de l’auto-inoculation. lésion, nous avons également été en mesure d’isoler une souche de HSV qui était sensible à Acv. Les lésions résolues complètement après traitement avec des doses plus élevées de Acv In, la lésion ne s’est pas résolue jusqu’à ce que le patient reçoive une infection. L’immunité à médiation cellulaire joue un rôle important dans l’éradication de la maladie à VHS La grande variabilité dans les capacités des patients immunodéprimés Le contrôle des infections virales est un facteur majeur de confusion des tests d’efficacité de toute thérapie antivirale. Des réponses favorables ont été observées chez la plupart de nos patients indépendamment de la thérapie Six épisodes de maladie résolus sans traitement En outre, dans les épisodes pour lesquels les isolats HSV étaient sensibles Valeurs d’ID de & gt; μg / mL et pour lesquels les patients ont été traités avec Acv, les lésions ont disparu en utilisant des schémas thérapeutiques standard de l’agent antiviral, ce qui renforce la constatation que la plupart des infections à HSV sont auto-limitées, indépendamment du traitement. ces patients pourraient être liés à des circonstances autres que la sensibilité in vitro. La description de HSV comme résistant aux valeurs d’Acv ID de & gt; μg / mL est probablement approprié, sur la base d’études multiples , d’autres facteurs, tels que l’adhérence incomplète au traitement, une mauvaise absorption du médicament et l’interaction entre médicaments, doivent être pris en compte avant de suspecter une résistance au traitement antiviral. infection primaire, le VHS demeure latent dans l’organisme à vie et, de temps en temps, le virus se réactive et produit une maladie récidivante. Les récurrences reflètent probablement le virus responsable de l’infection primaire Au cours du suivi, un total de récurrences de la maladie ont été enregistrés Tous les isolats sauf HSV étaient clairement sensibles à l’Acv in vitro, une constatation qui montre que l’apparition de la résistance est très rare lorsque Acv est utilisé à des doses standard pour gérer les infections aiguës. En résumé, en% des patients de notre étude de , nous avons détecté une souche de HSV avec une faible sensibilité à l’Acv in vitro ID, & gt; μg / mL Les résultats de l’ECR étaient étroitement liés aux réponses cliniques chez nos patients. % de lésions qui ont donné des souches de HSV devenues sensibles à un ID d’Acv de & lt; μg / mL résolu avec traitement par Acv Chez les patients, les résultats de l’ECR étaient incapables de prédire l’échec du traitement. Le statut immunologique de ces patients en phase terminale du SIDA peut avoir joué un rôle significatif dans la persistance des lésions. Isolats du VHS pour la sensibilité à l’Acv La détermination de la sensibilité des souches du VHS ne doit être indiquée que pour les virus isolés chez les patients présentant des troubles immunologiques sévères et les lésions qui persistent ou s’aggravent pendant la période de traitement par Acv.

Remerciements

Nous sommes reconnaissants au Dr F Salmerón du Centro Nacional de Microbiología, Virología e Inmunología Sanitarias de Majadahonda, Espagne, pour toute son aide et pour avoir fourni la souche résistante