Leucocytes des voies génitales et excrétion de l’ARN génital de type 1 VIH

Contexte Le mécanisme du virus de l’immunodéficience humaine La transmission du VIH par des relations hétérosexuelles est inconnue Nous avons cherché à déterminer si la présence de cellules inflammatoires dans le vagin était associée à la présence de voies génitales VIH 1 VIH-1 RNAMéthodes Analyse d’une cohorte prospective longitudinale Les femmes infectées par le VIH-1 ont été évaluées à l’aide de prélèvements de plasma jumelés et cervicovaginaux. Les mesures de charge virale ont été effectuées à l’aide d’une amplification des séquences d’acide nucléique. Globules blancs trouvés dans le tractus génital GT WBC ont été quantifiés à l’aide d’un hémacytomètre. pour l’association avec l’excrétion virale c.-à-d. la charge virale génitale [GTVL] comprenait la vaginose bactérienne, la candidose et la trichomonase Des équations d’estimation généralisées ont été utilisées pour estimer la prévalence et les chances de GTVL détectable par GT WBC L’association a été examinée en présence et en absence de l’appareil génital inférieur infec Résultats: Un total de 97 femmes et 642 visites ont été incluses dans l’analyse. La durée médiane du suivi était de 304 mois. Trente femmes 31% avaient un GTVL détectable à chaque visite. La numération médiane de CD4 était de 525 cellules / μL La plupart des femmes étaient sous traitement antirétroviral naïf au départ Après ajustement de la charge virale plasmatique, les chances de GTVL détectable augmentent avec l’augmentation du GT WBC, avec un odds ratio de 136 95% intervalle de confiance, 11-17 par 1000 cellules augmentation du GT WBC chez les femmes sans infections du tractus génital inférieur Après ajustement de la charge virale plasmatique et des infections du tractus génital inférieur en les incorporant dans un modèle de régression, GT WBC reste significativement associé à GTVL, avec un odds ratio ajusté de 122 95% intervalle de confiance, 108-137Conclusions La présence de GT WBC est associée à un risque accru de GTVL détectable

Bien que la transmission hétérosexuelle du VIH semble inefficace [2], les femmes sont deux fois plus susceptibles que les hommes de contracter l’infection par le VIH lors des rapports vaginaux [3]. Cependant, l’exposition par voie hétérosexuelle est le mode prédominant de transmission du VIH-1. la source exacte du VIH du partenaire infecté et la cellule cible dans la muqueuse du receveur ne sont pas encore connues L’isolement du VIH-1 dans le tractus génital féminin a été signalé pour la première fois en 1986 [4], de nombreuses études ont évalué la présence, la quantité et les déterminants de l’excrétion du VIH-1 dans les sécrétions cervico-vaginales sous forme d’ARN du VIH-1 acellulaire, d’ARN du VIH-1 associé aux cellules, d’ADN proviral ou de virus cultivable [5-7] cette augmentation de l’excrétion de GT-1 GT comprend des altérations de l’environnement vaginal, telles que certaines infections génitales [2, 8]; utilisation de contraceptifs oraux [3]; et grossesse [4] Les cofacteurs virologiques et immunologiques, tels que la concentration plasmatique d’ARN du VIH-1 et le nombre de cellules CD4, influent également sur l’excrétion de GT [6, 9] Malheureusement, il existe peu de données On pense généralement que le GT féminin inférieur est le site primaire de l’infection par le VIH-1 chez les femmes. Une grande partie de la recherche antérieure sur la transmission du VIH a été consacrée à l’étude de la relation entre les LGTI Transmission du VIH Chez les femmes, les ulcères cervicaux et vaginaux ont été associés à une détection accrue du VIH-1 dans les sécrétions cervico-vaginales [7], et la maladie ulcéreuse génitale est un déterminant majeur de la transmission du VIH-1 [5] Les LGTI non-ulcératives augmentent également l’excrétion du VIH-1 Des études transversales ont démontré une augmentation de la prévalence du VIH-1 chez les femmes présentant des signes de cervicite mucopurulente causée par Neisseria gonorrhoeae. nd Chlamydia trachomatis [10], candidose vaginale [3], trichomonase [11] et vaginose bactérienne [1] Cependant, la présence de l’excrétion du VIH-1 chez la femme GT n’est pas complètement expliquée par la charge virale plasmatique PVL et les LGTI souvent diagnostiqués Bien que la PVL soit un facteur important d’excrétion virale génitale, il existe des preuves solides soutenant l’idée de compartimentalisation, ce qui pourrait expliquer les différences entre GT et PVL [12] L’épithélium du col de l’utérus et les constituants stromaux sous-jacents tout au long de la vie d’une femme en raison d’influences hormonales, physiques et infectieuses [13] Le VIH infecte d’abord les cellules de Langherhans situées dans les épithéliums du vagin, ainsi que les lymphocytes T, les macrophages et les cellules dendritiques des tissus subépéthodiques [14] Une fois dans la muqueuse génitale, le VIH entraîne une diminution des cellules CD4 et une augmentation des cellules CD8 [15] Des cytokines pro-inflammatoires, telles que le TNF-α, l’IL-1 et l’IL-10, sont également produites par ces cellules infectées. leucocytes [16] Les cytokines peuvent à la fois attirer davantage de cellules cibles pour le VIH et stimuler l’expression du VIH dans ces cellules via des récepteurs de type toll [17]. Les monocytes stimulés par IL-10 peuvent être infectés plus efficacement par le VIH [18]. Nos travaux précédents ont déterminé le profil de l’ARN du VIH-1 dans les mesures CVL par plasma jumelé et lavage vasculaire cervico-vaginal pendant 36 mois d’observation. Dans la présente analyse, nous avons évalué la relation entre la numération leucocytaire dans le liquide CVL et l’excrétion du VIH-1 chez la femme GT chez les femmes avec et sans femmes LGTIs diagnostiqués commun

Méthodes

Une analyse secondaire d’une cohorte prospective longitudinale a été réalisée. L’étude de cohorte initiale était une étude observationnelle visant à évaluer l’effet de la thérapie antirétrovirale et des facteurs associés à l’excrétion génitale du VIH [19]. On a proposé à des femmes de 18 ans et plus qui avaient un utérus et un col de l’utérus et qui recevaient des soins pour une infection par le VIH à l’hôpital Miriam Providence, RI ou au Memorial Hospital de Rhode Island Pawtucket d’être incluses dans la liste. Les participants ont signé des formulaires de consentement écrits et approuvés, et le protocole d’étude a été approuvé par les comités d’examen institutionnels des deux établissements. Des échantillons de plasma et de CVL ont été prélevés à chaque visite. Il a été conseillé aux participants de s’abstenir de tout rapport sexuel, d’utiliser des douches vaginales et d’utiliser d’autres produits intravaginaux. 48 heures avant les examens À l’entrevue de base, des antécédents démographiques, médicaux, sexuels et reproductifs ont été recueillis À chaque visite, des échantillons de LCV et de plasma ont été prélevés. Les examens devaient avoir lieu au milieu du cycle menstruel afin de réduire la variabilité. être vu avec des changements hormonaux Les sujets avec des pertes vaginales symptomatiques ne sont pas inclus et ont été renvoyés pour évaluation clinique Pour la collecte du liquide CVL, un spéculum a été placé dans le vagin pendant que le sujet était en position lithotomie dorsale, et le col était visualisé On instille des centimètres de solution saline normale dans la voûte vaginale et on dirige le courant de liquide vers l’orifice cervical. On laisse le liquide se regrouper dans le cul-de-sac postérieur pendant ~ 30 s, puis on l’aspire à l’aide de cette technique. Les mesures de charge de HIV-1 ont été réalisées en utilisant une amplification basée sur une séquence d’acide nucléique bioMérieux La limite inférieure de La numération des cellules a été effectuée par la méthode de l’hémacytomètre. Les cellules ont été comptées de manière standard, en utilisant cinq carrés de 1 mm et les comptes ont été moyennés. La vaginose bactérienne a été diagnostiquée selon les critères d’Amsel [20] ont été diagnostiqués en utilisant la culture La présence de sperme a été détectée en utilisant un test commercial disponible Abacus Diagnostics Trichomonase a été déterminée avec montage humide et visualisation des trichomonas motiles L’infection à Candida a été déterminée par la présence de symptômes vaginaux et la présence d’hyphes et / ou Toutes les lames ont été lues par des microscopistes expérimentés dans les 15 min de la collecte. La syphilis a été diagnostiquée à l’aide d’un plasma rapide. Le dépistage gonococcique, chlamydien et syphilitique a été réalisé seulement annuellement en raison de la faible prévalence de ces infections. effectuées à chaque visite Toutes les données relatives aux visites résultats positifs pour la grossesse ou le sperme ont été obtenus ont été exclus de l’analyse, pour éliminer ces facteurs comme une source de GT WBC ou comme une cause d’inflammation Dans l’analyse de la relation entre l’excrétion virale génitale et GT WBC en l’absence d’infection, les données Pour l’analyse de la relation entre l’excrétion virale génitale et GT WBC en présence de LGTI, les données relatives aux visites avec ces LTGI documentées ont été exclues des visites avec des signes de vaginose bactérienne, de candidose, de trichomonase, de gonorrhée, de chlamydia ou de syphilis. inclus En raison de la faible prévalence des infections gonococciques, chlamydiales et syphilitiques dans la cohorte, nous n’avons pas pu examiner l’influence de ces infections sur la charge virale GT HIV-1 GTVL et les mesures PVL étaient dichotomisées comme détectables & gt; 400 copies / mL ou indétectableNous avons utilisé une courbe ROC caractéristique de fonctionnement du récepteur pour déterminer la capacité du compte GT WBC à classer correctement les visites Nous avons utilisé le bootstrapping pour calculer les IC à 95% de la surface sous la courbe ROC, avec chaque patient comme unité de rééchantillonnage de base. En outre, des modèles de régression pour les données binaires longitudinales ont été ajustés en utilisant des équations d’estimation généralisées. examiner les probabilités d’excrétion de GT en fonction du nombre de GT GT seule et après avoir contrôlé les autres prédicteurs potentiels de l’excrétion de GT, incluant l’âge, l’origine ethnique, l’utilisation HAART et les modèles PVL détectables, en utilisant des sous-ensembles de visites avec et sans preuves. LGTI, comme décrit ci-dessus La signification statistique a été déterminée, en utilisant des SE robustes, à a = 05

Résultats

Les données de notre étude comprennent les résultats de 642 visites de 97 femmes. Les caractéristiques démographiques et cliniques de base de la cohorte sont présentées dans le tableau 1. Des détails supplémentaires sur la cohorte originale ont été publiés ailleurs [19] Le nombre médian de GT WBC était de 260 cellules par μL de gamme cervicovaginale, 0-16 600 cellules / μL A 64% des visites pour lesquelles des GT WBC ont été détectées, les neutrophiles étaient les seuls leucocytes. type détecté dans le liquide CVL Des macrophages ont été détectés dans 17% des échantillons, des lymphocytes détectés dans 20%, des éosinophiles détectés dans 17%, des basophiles détectés dans 0% et d’autres leucocytes détectés dans 24% Au départ, seulement 137% Au cours de l’étude, 489% des visites impliquaient des femmes recevant une multithérapie. Les schémas posologiques incluaient des inhibiteurs nucléosidiques de la transcriptase inverse, tels que la zidovudine, la lamivudine et / ou r stavudine; les inhibiteurs non nucléosidiques de la transcriptase inverse, tels que l’éfavirenz et la névirapine; et les inhibiteurs de la protéase, tels que l’indinavir, le nelfinavir ou le saquinavir

Tableau 1View largeDownload slideBaseline caractéristiques démographiques et cliniques de la cohorte prospective longitudinale des femmes infectées par le VIH-1Table 1View largeDownload slideBaseline caractéristiques démographiques et cliniques de la cohorte prospective longitudinale des femmes infectées par le VIH-1Le modèle de régression logistique qui a régressé GTVL sur GT WBC seul -contrôle de l’âge, de l’origine ethnique, de l’utilisation HAART, du nombre de cellules CD4 et de la PVL-correspond bien aux données La courbe ROC indique que la numération GT WBC seule est modérément capable de distinguer entre les échantillons positifs et ceux négatifs pour GTVL; l’aire sous la courbe ROC était de 066, avec un IC bootstrap 95% de 056-075. L’OR non-corrigé du GTVL détectable était estimé à 120 IC à 95%, 102-142 par 1000 cellules / μL d’augmentation du nombre GT WBC Huit- six femmes avec 240 observations ont contribué à l’analyse de régression logistique multivariée L’âge, l’origine ethnique, le nombre de cellules CD4 et l’utilisation HAART n’ont pas statistiquement significativement expliqué la variabilité de l’excrétion de GTVL dans le modèle multivarié, mais GT WBC et PVL étaient statistiquement significativement associés à GTVL Délivrance de la table 2 La prévalence prédite de l’excrétion de GT a augmenté de façon substantielle lorsque le nombre de GT GT a augmenté la figure 1

Tableau 2View largeTélécharger la diapositive Modèle de régression logistique multiple prédicteurs significatifs du tractus génital détectable Charge virale GT chez les femmes sans infection génitale détectableTable 2View largeTélécharger diapositive Modèle de régression logistique multiple prédicteurs significatifs du tractus génital détectable Charge virale GT chez les femmes sans infections génitales détectables

Figure 1View largeDownload Prédiction de la charge virale du tractus génital GTVL avec augmentation du tractus génital WBC GT Nombre de leucocytes chez les femmes sans infections génitales détectablesFigure 1Voir grandDownload slidePrévalence prédite de la charge virale du tractus génital GTVL avec augmentation du tractus génital WBC GT WBC compte chez les femmes sans infections génitales détectables impliquant les LGTI diagnostiqués ont été inclus dans l’analyse, il y avait 642 observations de 97 femmes Le nombre médian GT WBC de ces femmes était 340 cellules / μL gamme, 0-85,000 cellules / μL La prévalence des infections détectées dans cette cohorte est indiquée dans le tableau Aucune infection gonococcique, syphilitique ou chlamydienne n’a été détectée chez aucune femme de la cohorte; Les résultats d’une analyse de régression multivariée incluant les infections sexuellement transmissibles et le comptage GT WBC ont indiqué qu’aucun des LGTI détectés n’était indépendamment associé à la présence de GTVL après contrôle de la présence de GT WBCs table 3 Dans une analyse qui comprenait GTVL et d’autres covariables, la présence de GT WBC était indépendamment associée à la présence de GTVL, même après contrôle des LGTI et le prédicteur connu le plus fort de l’excrétion virale GT, PVL En outre, Nous avons trouvé que les chances de détection de GTVL étaient plus faibles chez les femmes ayant des numérations CD4 plus élevées. La relation entre LGTI et GTVL a été examinée à la fois comme une seule table d’infections et comme une donnée de groupe non montrée. dans les deux formes Dans les analyses bivariées qui ont examiné l’association entre la présence de GT WBC et chacun des LTGI s, seule la trichomonase était significativement associée statistiquement à la présence de GT WBC P × 001

Tableau 3View largeTélécharger une diapositiveMultiples résultats de modèles de régression logistique chez des femmes ayant des infections génitales détectablesTable 3View largeTélécharger une diapositiveMultiples résultats de modèles de régression logistique chez des femmes présentant des infections génitales détectables

Discussion

[24] Une étude examinant les facteurs associés à l’excrétion du VIH chez les hommes a révélé que la maladie avancée, la faible numération des cellules CD4 et le nombre élevé de leucocytes séminaux étaient associés de façon indépendante à l’excrétion virale [25]. association entre les types d’infection qui ont précédemment été épidémiologiquement liés à la séroconversion VIH [21] et l’excrétion du VIH [8] spécifiquement, la trichomonase et la vaginose bactérienne Nous n’avons pas trouvé d’association indépendante entre ces infections et l’excrétion GTVL; nous avons plutôt trouvé que GT WBC semble être le moteur de l’association, au moins dans le cas de la trichomonase. Nous avons été incapables d’identifier une source de WBC, malgré des tests pour plusieurs infections courantes liées à la transmission et à l’acquisition du VIH. [21] ont trouvé que d’autres LTGI non ulcératives étaient associées à un risque accru de séroconversion VIH, en particulier gonococciques et chlamydiales. Il a été démontré que le traitement de la cervicite diminue l’excrétion du VIH dans le GT [26, 27]. cervicite symptomatique ou infections gonococciques ou chlamydiales dans notre population; par conséquent, nous ne pouvions pas tirer de conclusions sur la relation entre ces infections et GTVL Les deux infections sont généralement associées à des comptes élevés de GT WBC en raison de la cervicite qu’ils causent. Les forces de notre étude comprennent la nature longitudinale de la collection d’échantillons. Nous excluons les femmes qui ont récemment utilisé des produits vaginaux ou qui ont eu des rapports sexuels vaginaux, réduisant ainsi d’autres facteurs de confusion potentiels de l’excrétion génitale. Nous avons pu montrer que les femmes ont récemment utilisé des produits vaginaux ou ont eu des rapports sexuels vaginaux. l’association indépendante entre GTVL et GT WBC compte après contrôle des facteurs confondants, y compris PVL, qui est le prédicteur le plus fort de l’excrétion génitale [19] Nous avons également utilisé l’analyse statistique pour les mesures répétées et créé les intervalles de confiance de notre modèle avec la méthode bootstrap. patient comme l’unité de rééchantillonnage de base de sorte que statistica lLindépendance n’est pas violéeL’étude comportait plusieurs limites Les LTGI ont été incluses ou exclues de l’analyse sur la base de tests de sensibilité et de spécificité imparfaites. La méthode wet-mount a été utilisée pour diagnostiquer la trichomonase, la vaginose bactérienne et la candidose vulvovaginale. L’utilisation de tests plus sensibles, tels que la culture pour la trichomonase et l’infection à Candida et les scores de coloration de Gram et de Nugent pour la vaginose bactérienne, peut avoir amélioré la détection de ces LGTIs communs. Il a été démontré que cette méthode est mieux corrélée avec les taux d’ARN du VIH du GT, mais cette méthode n’est pas encore disponible sur le plan clinique [28]. L’utilisation du diagnostic pratique clinique pour les LGTI, tel que le montage humide, rend les résultats cliniques Nous n’avons pas non plus recueilli d’informations concernant l’excrétion asymptomatique du virus de l’herpès simplex, qui a été associée excrétion enzymatique du VIH [29] À notre connaissance, cependant, aucune donnée n’a documenté une association entre l’infection par le virus de l’herpès simplex asymptomatique et la présence d’un nombre accru de leucocytes génitaux. Aucun cas de gonorrhée, de chlamydia ou de syphilis cohorte de femmes âgées infectées par le VIH Ces résultats peuvent ne pas être applicables aux femmes plus jeunes avec des taux plus élevés de maladies sexuellement transmissibles Nous n’avons pas non plus testé les causes non spécifiques de cervicite, comme les espèces Mycoplasma, mais nous avons exclu la collecte des patients présentant des pertes vaginales symptomatiques. CVL utilisé, une technique qui a été critiquée pour avoir un effet de dilution Nous avons également déterminé GTVL avec l’utilisation de l’ARN du VIH-1; d’autres préfèrent l’utilisation de l’ADN proviral pour la mesure de GTVL Nous n’avons pas examiné d’autres marqueurs inflammatoires, tels que les niveaux de cytokines, pour déterminer l’étendue de l’inflammation qui était liée à la présence de WBC. Nous ne contrôlions pas le sous-type du VIH. croient que la plupart de nos sujets avaient la maladie du clade B, en raison du pays d’origine des sujets inscrits Les formulaires de consentement n’étaient disponibles qu’en anglais et en espagnol La majorité des sujets contractaient leur maladie aux États-UnisEn résumé, cette analyse montre que indépendamment associé à GTVL Implications de ces données comprennent l’utilité possible d’utiliser GT WBC compte comme un marqueur de substitution pour la présence de GT VIH Actuellement, il n’existe pas de tests disponibles dans le commerce pour la détection de GT VIH orientations futures comprennent la détermination de la relation entre l’herpès génital asymptomatique l’infection par le virus simplex et la présence de leucocytes génitaux dans le contexte de l’excrétion du VIH, ainsi que cidant le mécanisme par lequel GT WBCs réguler à la hausse l’excrétion du virus

Remerciements

Soutien financier Brown Medical School-Women & amp; K2 HD050108 par le biais des Instituts nationaux de la santé, des Instituts nationaux de la santé R01 AI40350, K24 AI066884 et P30 AI42853, et du Centre Emory pour la recherche sur le SIDA P30 AI050409Populs potentiels d’intérêts Tous les auteurs: pas de conflits